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第1篇

[關(guān)鍵詞] 骨關(guān)節(jié)炎;治療;綜述

[中圖分類號(hào)] R684.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-9701(2010)02-14-03

Treatment of Osteoarthritis:New Progress

XIAO DongliangZHAO Jinmin

Department of Orthopedic Trauma and Hand Surgery,the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021,China

[Abstract] Osteoarthritis(OA) is a common clinical degenerative disease,the number of patients gradually increases and its incidence increases with increasing age. There have been a great number of researches on its pathogenesis,drug and surgical treatment,with considerable progress in recent years.

[Key words] Osteoarthritis;Treatment;Review

骨性關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)又稱退行性關(guān)節(jié)炎,是一種慢性、漸進(jìn)性、退行性關(guān)節(jié)病變,是中老年人的常見(jiàn)疾病。其發(fā)生率隨年齡的增長(zhǎng)而升高,據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)50歲以上人口發(fā)病率為5%,膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率為9.56%;60歲以上人口發(fā)病率為20%,膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病率為78.5%。保守估計(jì),我國(guó)不同程度的OA患者至少在3000萬(wàn)以上,OA是致殘的重要原因之一,很多患者后期只能選擇關(guān)節(jié)置換。臨床治療方法很多,但迄今還沒(méi)有一種治療方法能有效阻斷OA的病理進(jìn)展過(guò)程,因此,目前的治療目標(biāo)主要是止痛和改善功能。本文對(duì)其治療方法簡(jiǎn)述如下。

1藥物療法

目前多采用藥物治療OA,治療藥物主要可以分為兩大類。

1.1解熱鎮(zhèn)痛和非甾體類抗炎藥

如非類固醇消炎藥(nonsteroidant inflammatory drugs,NSAID),但這些藥物的使用是有風(fēng)險(xiǎn)的,而且其有效性是否優(yōu)于安全性尚無(wú)肯定的評(píng)價(jià)。根據(jù)臨床試驗(yàn)報(bào)告,應(yīng)用NSAID藥物的OA患者中,只有30%可以減輕疼痛,15%可以改善功能。非甾體類抗炎藥在一定的程度上能夠改善骨關(guān)節(jié)炎的臨床癥狀,但近年來(lái)己經(jīng)發(fā)現(xiàn)這類藥物可抑制關(guān)節(jié)軟骨中的基質(zhì)成分蛋白多糖的合成,加速關(guān)節(jié)軟骨的退行性變,遠(yuǎn)期療效不容樂(lè)觀。

1.2可改變骨關(guān)節(jié)炎病程的藥物

主要有透明質(zhì)酸、硫酸氨基葡萄糖、S-腺苷甲硫氨酸、胰島素、雌激素和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑。在拮抗病變中致軟骨退變因子的藥物中,四環(huán)素最為常用。在骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過(guò)程中,基質(zhì)金屬蛋白酶的活性增強(qiáng)對(duì)于軟骨基質(zhì)的降解起著關(guān)鍵性的作用,而四環(huán)素可通過(guò)抑制金屬蛋白酶的活性,阻止膠原的分解和軟骨的破壞。四環(huán)素族中以多西環(huán)素,二甲胺環(huán)素的作用最強(qiáng)。過(guò)氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)能夠清除組織代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化物和氫氧根。研究證實(shí),這些代謝產(chǎn)物的堆積可引起組織損傷,軟骨破壞和纖維化改變。用牛肝提取的SOD商品名Orgetin,行關(guān)節(jié)內(nèi)注射能有效的緩解骨關(guān)節(jié)疼痛,其療效與皮質(zhì)類固醇激素相當(dāng),但作用緩慢、療效近期不佳。

評(píng)價(jià):這些藥物療法的共同特點(diǎn)是:治療OA的確切機(jī)制還在研究當(dāng)中,已獲準(zhǔn)在臨床使用,并獲得一定的臨床療效,無(wú)明顯毒副作用,可長(zhǎng)期安全使用。雖然有些藥物起效慢,但也有一定的鎮(zhèn)痛作用,能減少患者對(duì)NSAID的需要量,能延緩OA的進(jìn)展。

2中醫(yī)療法

中醫(yī)中藥的研究較多[1,2],既有傳統(tǒng)的活血化瘀、內(nèi)服外敷的復(fù)方中草藥,針刺,溫灸等方法,又有結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)成果發(fā)展起來(lái)的電針、水針及針刀療法。尤其是近年發(fā)展起來(lái)的針刀療法,除有針刺作用外,還可以對(duì)患者膝周軟組織“筋傷”進(jìn)行松解、剝離和切割,彌補(bǔ)了傳統(tǒng)針灸的不足,提高了療效和縮短了療程,并且理論上也為針灸治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎提供了一種新的思路。

評(píng)價(jià):中藥內(nèi)服、推拿理療、局部外用藥、膏藥、搽劑、離子導(dǎo)入、針灸療法和小針刀療法等治療方式不能阻礙病情的進(jìn)展,大多數(shù)只作為綜合治療的一部分,能部分緩解骨性關(guān)節(jié)炎的癥狀、延緩病情發(fā)展,但仍然沒(méi)成為公

認(rèn)明確有效的治療方法。

3注射療法

注射療法可分為局部痛點(diǎn)注射和關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射。其特點(diǎn)是藥物直接到達(dá)病灶局部,可以消除炎癥刺激,緩解肌肉緊張或肌痙攣,改善局部血液循環(huán),制止原發(fā)和激發(fā)的疼痛。注射療法的藥物選擇有皮質(zhì)激素、維生素B族類、利多卡因及消炎鎮(zhèn)痛藥等。近年來(lái)采用關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射玻璃酸鈉對(duì)早中期骨性關(guān)節(jié)炎有良好的作用,對(duì)晚期骨性關(guān)節(jié)炎也有一定的療效,對(duì)創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎、滑膜炎患者療效肯定,尤其對(duì)干燥綜合征療效明確,不良反應(yīng)較少。透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)屬粘多糖物質(zhì),是關(guān)節(jié)液及軟骨基質(zhì)的主要成份,當(dāng)發(fā)生骨性關(guān)節(jié)炎時(shí),HA在關(guān)節(jié)內(nèi)的產(chǎn)生和代謝發(fā)生異常,滑液中的HA濃度和相對(duì)分子量明顯降低,作用下降,而使關(guān)節(jié)軟骨表面受到破壞。賈經(jīng)漢[3]膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉結(jié)合功能鍛煉治療膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)病160例170膝,療效滿意。曲安奈德、生理鹽水及利多卡因混合膝關(guān)節(jié)腔注射,也得到類似效果。消炎鎮(zhèn)痛藥物局部應(yīng)用,可有效降低其對(duì)患者的副作用評(píng)價(jià):玻璃酸鈉、曲安奈德、生理鹽水及利多卡因混合膝關(guān)節(jié)腔注射,消炎鎮(zhèn)痛藥物局部應(yīng)用,大多可緩解病人的疼痛癥狀、療效經(jīng)過(guò)臨床證實(shí)也較明顯。但是,短時(shí)間內(nèi)多次大量注射皮質(zhì)類固醇類藥物,可加重骨關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨的損害,進(jìn)一步加重病情。同時(shí)注射時(shí)若消毒不嚴(yán)格,可能引起關(guān)節(jié)腔內(nèi)感染,導(dǎo)致嚴(yán)重后果。

4外科手術(shù)療法

目前手術(shù)方法主要有以下幾種:切開(kāi)直視下清理術(shù)、關(guān)節(jié)鏡下清理術(shù)、軟骨下鉆孔術(shù)、膝關(guān)節(jié)融合術(shù)、截骨術(shù)、人工關(guān)節(jié)置換術(shù)和軟骨移植術(shù)。經(jīng)過(guò)正規(guī)的非手術(shù)治療而效果不佳,或者癥狀較重而影響日常生活的患者,可以考慮外科手術(shù)治療。

4.1軟骨下鉆孔術(shù)

骨關(guān)節(jié)炎患者早期關(guān)節(jié)的主要病理改變是軟骨端松質(zhì)骨髓內(nèi)靜脈引流不暢,骨內(nèi)靜脈回流受阻所致的骨內(nèi)靜脈瘀滯[4],進(jìn)而形成骨內(nèi)壓增高,引起疼痛與功能障礙。因此,早期的骨性關(guān)節(jié)炎可采用軟骨下鉆孔減壓術(shù),以緩解疼痛癥狀。

4.2關(guān)節(jié)鏡下手術(shù)

隨著微創(chuàng)手術(shù)的發(fā)展,腔鏡被大量用于骨性關(guān)節(jié)炎的診斷和治療,關(guān)節(jié)鏡下治療骨性關(guān)節(jié)炎具有安全、有效、創(chuàng)傷小、手術(shù)時(shí)間短,術(shù)后康復(fù)快,可重復(fù),并發(fā)癥少等優(yōu)點(diǎn),是治療早、中期骨性關(guān)節(jié)炎的一種較好方法。關(guān)節(jié)鏡下雙極射頻技術(shù)具有融切溫度低和組織熱損傷小的顯著優(yōu)點(diǎn)。雙極射頻的工作溫度為40～70℃,它通過(guò)離子流使靶組織大分子的氫鍵斷裂,膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu)解聚,形成高效精確的汽化融切效果[5]。張克等[6]于關(guān)節(jié)鏡下單純清理沖洗與沖洗清理加鉆孔,術(shù)后隨訪反饋:對(duì)于重度OA鉆孔并不能提高遠(yuǎn)期療效。

4.3關(guān)節(jié)融合術(shù)

對(duì)于嚴(yán)重的骨關(guān)節(jié)炎患者,關(guān)節(jié)疼痛嚴(yán)重,但因經(jīng)濟(jì)或其他原因不能行關(guān)節(jié)置換術(shù)者,關(guān)節(jié)融合術(shù)也是一種手術(shù)方式,特別對(duì)從事體力勞動(dòng)的患者,將病變關(guān)節(jié)融合于功能位,可獲得穩(wěn)定、無(wú)痛、能負(fù)重的關(guān)節(jié),融合喪失了關(guān)節(jié)動(dòng)度。但行走不痛,具備有一定的勞動(dòng)和生活自立能力。

4.4截骨術(shù)

嚴(yán)重膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致膝關(guān)節(jié)內(nèi)、外翻畸形,需行脛骨高位截骨術(shù)治療,該術(shù)式主要針對(duì)較年輕且病情重的患者,從生物力學(xué)角度來(lái)分該術(shù)式可分為膝內(nèi)側(cè)間隙OA 脛骨截骨術(shù)和膝外側(cè)間隙OA 脛骨截骨術(shù),前者效果優(yōu)于后者。術(shù)前負(fù)重位測(cè)量解剖軸股脛角(femorotibial angle,FTA),根據(jù)術(shù)前設(shè)計(jì)計(jì)算的矯正度數(shù)按每1mm 寬矯正1°為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行脛骨楔形截骨,截骨的平面至少達(dá)脛骨關(guān)節(jié)面遠(yuǎn)端2cm。脛骨內(nèi)側(cè)高位截骨術(shù)5年內(nèi)療效最佳,長(zhǎng)期隨診資料[7]表明截骨手術(shù)1～3年內(nèi)效果最好,隨著時(shí)間的推移,效果則逐漸下降。

4.5人工關(guān)節(jié)置換術(shù)

隨著OA病情的發(fā)展,關(guān)節(jié)破壞嚴(yán)重,關(guān)節(jié)置換術(shù)成為最終的手術(shù)選擇。張明等[8]對(duì)29膝的骨性關(guān)節(jié)炎病例行人工膝關(guān)節(jié)置換手術(shù),全部采用后方穩(wěn)定性假體,術(shù)后安排專職康復(fù)醫(yī)師指導(dǎo)早期功能鍛煉,術(shù)后隨訪所有患者膝活動(dòng)度均≥90°,除1例雙膝置換的一側(cè)膝關(guān)節(jié)尚有輕度疼痛外,其余患者術(shù)前疼痛經(jīng)手術(shù)治療后均消失、效果較為明顯。

4.6軟骨移植術(shù)

最近有自體軟骨種植術(shù)和移植術(shù)的報(bào)道,用關(guān)節(jié)鏡取得200～300mg自體軟骨標(biāo)本后,行軟骨細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)周,于病變部位行手術(shù)清理,再將人工培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞注入關(guān)節(jié)軟骨缺損部,以骨膜縫合覆蓋,并以自體或人工纖維蛋白凝膠加固,術(shù)后制定專門(mén)的康復(fù)鍛煉計(jì)劃。此法適用于股骨髁和滑車(chē)的灶性軟骨缺損或剝脫性骨軟骨炎。自體骨軟骨移植的方法是將股骨遠(yuǎn)端非承重部位截取的骨柱和自體軟骨移植到股骨關(guān)節(jié)表面,須先處理好的軟骨缺損隧道。上述兩種治療方法,因國(guó)內(nèi)報(bào)道不多見(jiàn)[9],需作更長(zhǎng)時(shí)間的隨訪才能明確其遠(yuǎn)期療效。

評(píng)價(jià):目前手術(shù)治療方法比較常用,特別是關(guān)節(jié)鏡手術(shù)較多并逐年增加,技術(shù)也日益成熟并普及,研究探討也很多。但所有OA手術(shù)治療都不能很好地解決關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)與重建問(wèn)題,更不能逆轉(zhuǎn)關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)一步被破壞的進(jìn)程,自體軟骨移植法近年開(kāi)展、比較新穎,但其遠(yuǎn)期療效尚待進(jìn)一步隨訪觀察。

5基因治療法

隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和免疫生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展和交叉滲透,基因治療OA已日受關(guān)注,它不僅可以彌補(bǔ)上述各種治療方法的不足,而且還可以針對(duì)其發(fā)病機(jī)制,在分子水平進(jìn)行治療?；蛑委熆煞譃樯臣?xì)胞基因治療(germ cell gene therapy)和體細(xì)胞基因治療(somatic cell gene therapy)兩大類,治療策略主要分為:基因替代、基因修正、基因增強(qiáng)、基因抑制(基因失活)基因治療在理想情況下,可特異性地針對(duì)靶細(xì)胞,并可以調(diào)節(jié)合成、分解代謝之間的平衡,也可以調(diào)控炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生。但目前可以用作基因治療的靶向藥物仍然很少,研究的重點(diǎn)主要是通過(guò)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)來(lái)補(bǔ)充一些骨性關(guān)節(jié)炎中缺乏或者不足的蛋白分子。1992年Bandara等[10]以反轉(zhuǎn)錄病毒為載體,將β半乳糖苷酶基因轉(zhuǎn)移到體外培養(yǎng)的兔滑膜細(xì)胞中,擴(kuò)增后再將轉(zhuǎn)基因細(xì)胞回植到兔膝關(guān)節(jié)中,使得β半乳糖苷酶可以在兔的膝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)3個(gè)月,此后許多學(xué)者進(jìn)行了有益的探索。近年來(lái),人們逐漸認(rèn)識(shí)到白介素-1 特別是白介素-1β在骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中起著致關(guān)重要的作用,并認(rèn)為白介素-1β水平的不斷升高是骨關(guān)節(jié)炎軟骨進(jìn)行性退行性變的重要原因之一。如何應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)減少病變關(guān)節(jié)白介素-1的產(chǎn)生或提高白介素-1拮抗劑的表達(dá)量,以避免或者延緩骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展,已成為當(dāng)前人們關(guān)注的焦點(diǎn)。Russel l等[11]在骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生之前將(human interleukin-1)hIL-1ra基因?qū)雽?shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)節(jié)腔,發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)內(nèi)持續(xù)表達(dá)的hIL-1ra,可明顯抑制關(guān)節(jié)的炎癥反應(yīng),并阻止關(guān)節(jié)軟骨的破壞,從而提出了基因療法在骨關(guān)節(jié)炎的預(yù)防和治療中應(yīng)用的可能性。Amin等[12]用腺病毒載體轉(zhuǎn)染單層培養(yǎng)的人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞,并將基因修飾過(guò)的軟骨細(xì)胞移植到體外培養(yǎng)的骨關(guān)節(jié)炎軟骨表面,發(fā)現(xiàn)移植的軟骨細(xì)胞黏著并且整合入軟骨表而,持續(xù)表達(dá)(interleukin-1,IL-1)受體拮抗蛋白(interleukin-1Ra,IL-1Ra)。Fernandes等[13]將兔分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組,通過(guò)關(guān)節(jié)內(nèi)質(zhì)粒注射觀察局部IL-1Ra基因治療對(duì)于半月板切除術(shù)后的兔骨關(guān)節(jié)炎模型結(jié)構(gòu)改變的有效性,觀察到骨贅明顯減小,軟骨組織缺損明顯減小,且減小的程度與IL-1Ra質(zhì)粒的注射量程正相關(guān)。Frisbie等[14]用腺病毒invivo轉(zhuǎn)移馬IL-1Ra基因至馬骨關(guān)節(jié)炎模型中,可提高關(guān)節(jié)內(nèi)IL-1Ra基因表達(dá)大約28d,并起到軟骨保護(hù)作用。一些學(xué)者應(yīng)用特定的基因轉(zhuǎn)移載體將白介素-1受體拮抗蛋白基因[10]轉(zhuǎn)移到存在病變的關(guān)節(jié)軟骨或滑膜組織中,使該基因在關(guān)節(jié)內(nèi)大量表達(dá),從而阻斷病理狀態(tài)下所產(chǎn)生白介素-1的破壞作用,達(dá)到預(yù)防、治療和長(zhǎng)期維持骨關(guān)節(jié)炎緩解狀態(tài)的目的。在體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)基因介導(dǎo)胰島素樣生長(zhǎng)因子-1和白介素-1受體拮抗基因,修復(fù)軟骨基質(zhì),從而促進(jìn)受損軟骨再生[15]?；铙w實(shí)驗(yàn)中,將白介素-1受體拮抗基因轉(zhuǎn)入骨性關(guān)節(jié)炎的兔膝關(guān)節(jié),可以有效地阻止骨性關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展[16]。

評(píng)價(jià):基因治療是一種新技術(shù)、多學(xué)科的療法,但基因治療尚存在以下問(wèn)題:(1)轉(zhuǎn)移基因在宿主細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)過(guò)程難以人為控制,難以得到按需表達(dá)、按量表達(dá)、按時(shí)間表達(dá)。(2)病毒載體的安全性尚未完全確認(rèn),還不能完全確定其是否存在致癌性和免疫源性。(3)單一的高純度的細(xì)胞分離與擴(kuò)增技術(shù)有待進(jìn)一步提高。(4)由于OA的發(fā)病涉及到多個(gè)因子,故多基因聯(lián)合應(yīng)用亦應(yīng)得到更多的關(guān)注?；蛑委熓且环N新興的治療手段,交叉多學(xué)科、多領(lǐng)域。雖然目前基因治療OA的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果展現(xiàn)了良好的臨床應(yīng)用前景,但要真正用于臨床治療,還有大量工作要做,有待更深一步的研究。

總之,各種治療方法在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床上都有嘗試,一些療法也顯示出明顯的療效和優(yōu)越性,但由于骨性關(guān)節(jié)炎的確切病因和發(fā)病機(jī)制仍不太清楚,因此對(duì)其治療仍難以達(dá)到理想的效果,尚無(wú)法從根本上阻止和治療骨性關(guān)節(jié)炎。隨著治療新方法、新技術(shù)的不斷出現(xiàn),特別是基因治療理念的引入,有望在不久的將來(lái)可改變治療骨關(guān)節(jié)炎的現(xiàn)狀。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 倫志堅(jiān),葉繼英. 腹針結(jié)合局部針刺治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎[J]. 廣東醫(yī)學(xué),2006,27(1):12.

[2] 陳述祥,司徒堅(jiān),楊運(yùn)東,等. 自制復(fù)方中藥對(duì)膝骨性關(guān)節(jié)炎家兔血液流變及病理形態(tài)的影響[J]. 中國(guó)臨床康復(fù),2005,9(30):147-149.

[3] 賈經(jīng)漢,彭京,李明. 關(guān)節(jié)內(nèi)注射透明質(zhì)酸鈉治療膝骨性關(guān)節(jié)炎[J]. 中國(guó)骨傷,2006,19(7):416.

[4] Phillips RS. Phlebography in osteoarthritis of the hip[J]. J Bone Joint Surg Br,1966,48(2):280-288.

[5] Spahn G, Mückley T, Kahl E, et al. Factors affecting the outcome of arthroscopy in medial-compartment osteoarthritis of the knee[J]. Arthroscopy. 2006,22(11):1233-1240.

[6] 張克,李子劍,劉巖,等. 膝骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)鏡手術(shù)方式探討[J]. 中國(guó)微創(chuàng)外科志,2002,2(2):110-111.

[7] Insall JN,Joseph DM,Msika C. High tibial osteotomy for varus gonarthrosis. A long-term follow-up study[J]. J Bone Joint Surg Am,1984,66(7):1040-1048.

[8] 張明,周定球,楊智賢,等. 全膝關(guān)節(jié)表面置換術(shù)治療膝骨性關(guān)節(jié)炎[J]. 臨床骨科雜志,2006,9(2):109-110.

[9] 張繼春,高石軍,陳百成,等. 關(guān)節(jié)鏡下自體骨軟骨移植修復(fù)股骨關(guān)節(jié)面軟骨缺損[J]. 中華骨科雜志,2004,24(3):158-161.

[10] Bandara G,Mueller GM,Galea-Lauri J,et al. Intraarticular expression of biologically active interleukin 1-receptor-antagonist protein by ex vivo gene transfer[J]. Proc Natl Acad Sci USA,1993,90(22):10764 -10768.

[11] Khalifeh MS,Al-Rukibat R,Hananeh W,et al. Investigation of the role of tumour necrosis factor-{alpha},interleukin-1{beta},interleukin-10,nitric oxide and rheumatoid factor-immunoglobulin M in a rat model of arthritis[J]. Lab Anim,2009 Oct 26. [Epub ahead of print].

[12] Amin AR. Type II interleukin-1beta receptor: a candidate for gene therapy in human arthritis[J]. Clin Orthop Relat Res,2000(379 Suppl):S179-188.

[13] Fernandes J,Tardif G,Martel-Pelletier J,et al. In vivo transfer of interleukin-1 receptor antagonist gene in osteoarthritic rabbit knee joints: prevention of osteoarthritis progression[J]. Am J Pathol,1999,154(4):1159-1169.

[14] Frisbie DD,McIlwraith CW. Evaluation of gene therapy as a treatment for equine traumatic arthritis and osteoarthritis[J]. Clin Orthop Relat Res,2000,(379 Suppl):S273-287.

[15] Morisset S,Frisbie DD,Robbins PD,et al. IL-1ra/IGF-1 gene therapy modulates repair of microfractured chondral defects[J]. Clin Orthop Relat Res,2007,462:221-228.

第2篇

【關(guān)鍵詞】基因診斷；單基因遺傳?。粦?yīng)用；分析

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.05.112文章編號(hào)：1004-7484（2014）-05-2498-01

1前言

單基因遺傳病是導(dǎo)致患者出生缺陷最重要的一個(gè)原因，近幾年在臨床中非常的常見(jiàn)，對(duì)于該中遺傳病的研究也逐漸增多。當(dāng)前多以基因診斷判斷單基因遺傳病，基因診斷的取材非常的方便，診斷的準(zhǔn)確性也非常的高，將其應(yīng)用與單基因遺傳病的診斷工作中，具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

2基因診斷概述及特點(diǎn)分析

基因診斷在醫(yī)學(xué)界中又被定義為分子診斷、DNA診斷?；蛟\斷主要是采取基因檢測(cè)的方法，對(duì)從患者的體內(nèi)提取到的樣本直接進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)基因結(jié)構(gòu)與基因表達(dá)水平改變的具體情況，檢測(cè)出患者所帶病原體的基因類型，以此作為判斷患者的體內(nèi)是否攜帶著某些病原微生物，或者是基因出現(xiàn)異常情況?；蛟\斷的相關(guān)技術(shù)在近幾年已經(jīng)廣泛應(yīng)用于單基因遺傳病的臨床診斷中，并取得了一定的功效，對(duì)我國(guó)衛(wèi)生事業(yè)做出了很大貢獻(xiàn)。

與傳統(tǒng)的單基因遺傳病診斷方法不同，基因診斷的技術(shù)具有其非常鮮明的特點(diǎn)：首先，基因診斷主要是從患者的基因水平層面對(duì)疾病的發(fā)病原理、發(fā)病原因進(jìn)行徹底的揭示。其次，基因診斷還可以用作于癥狀前的分析和診斷，使產(chǎn)前的診斷時(shí)間得以有效的縮短[1]。再次，基因診斷還具有來(lái)源非常廣且取材非常少的特點(diǎn)，只要有微量的標(biāo)準(zhǔn)，就可以對(duì)其進(jìn)行科學(xué)的診斷。最后，由于艾滋病和肝炎等遺傳病的病原體既不能夠在體外進(jìn)行培植，也不可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行安全培植，給這類病原體的檢測(cè)工作帶來(lái)影響。但是基因診斷的技術(shù)打破了地域限制，實(shí)現(xiàn)對(duì)病原體的快速檢測(cè)。

3基因診斷在單基因遺傳病中的具體應(yīng)用

基因診斷在單基因遺傳病中的應(yīng)用主要包括B型血友病、苯丙酮尿癥、地中海貧血等遺傳疾病中。第一，基因診斷應(yīng)用于B型血友病。B型血友病是一種隱性的、出血性的遺傳疾病，主要發(fā)病于男性人群中，而且發(fā)病率和散發(fā)率都非常的高。B型血友病是一種對(duì)人類健康具有極大危害的遺傳病，在臨床中主要表現(xiàn)為患者在兒童期就出現(xiàn)了嚴(yán)重的出血傾向，直到青春期之后出血會(huì)自發(fā)的減輕。針對(duì)這種遺傳病，目前在臨床醫(yī)學(xué)中還沒(méi)有找到根治的方法，因此針對(duì)高危胎兒與病原攜帶者，給予他們科學(xué)有效的基因診斷顯得非常的關(guān)鍵[2]。同時(shí)，B型血友病患者基因缺陷的類型也是非常的繁多，不但包括插入和缺失，還包括點(diǎn)突變，而其中又以單個(gè)堿基突變?yōu)樽疃嗟囊环N類型。

近幾年，常用來(lái)連鎖分析B型血友病的方法主要包括短串聯(lián)的重復(fù)序列和限制性片段的長(zhǎng)度多態(tài)性等，然而中國(guó)人的酶切位點(diǎn)大多都沒(méi)有多態(tài)性。連鎖分析的方法具有實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單和分析結(jié)果的過(guò)程也簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，而且該診斷方式的有效性與快速性能很高，對(duì)于那些攜帶著B(niǎo)型血友病或具有家族遺傳性B型血友病患者的進(jìn)行產(chǎn)前診斷，具有非常顯著的臨床意義。

第二，將基因診斷的技術(shù)應(yīng)用于苯丙酮尿癥患者的診斷工作中。苯丙酮尿癥已經(jīng)成為兒科臨床中非常常見(jiàn)的一種氨基酸病，主要是因?yàn)楸奖彼嵩诖x的過(guò)程中出現(xiàn)酶缺陷，影響了苯丙氨酸順利轉(zhuǎn)變?yōu)槔野彼幔贡奖彼岷屯岬男罘e，最終從患者的尿液中排出。苯丙酮尿癥對(duì)于患兒的健康具有非常嚴(yán)重的影響，使患兒發(fā)生繼發(fā)性的癲癇病與智能障礙的幾率增加。對(duì)于苯丙酮尿癥的診斷，基因診斷的方法具有一定的功效，該方法可以從患兒的DNA水平層面去了解病因，診斷率非常的高，并且能夠在患兒的任何發(fā)育階段對(duì)其有核細(xì)胞實(shí)施診斷，并成為產(chǎn)前診斷研究的依據(jù)。

第三，將基因診斷的技術(shù)應(yīng)用于地中海貧血患者的診斷工作中。地中海貧血主要是因?yàn)橹榈鞍椎幕虬l(fā)生了突變，阻礙了其生物合成，且生物合成的產(chǎn)量也不足，導(dǎo)致地中海貧血的發(fā)生。地中海貧血即為珠蛋白突變而生成的具有障礙性特征的貧血，是一組具有遺產(chǎn)性和溶血性的隱性貧血疾病，也是一種常見(jiàn)的遺傳疾病，主要包括α珠蛋白生成障礙性貧血和β珠蛋白生成障礙性貧血這兩種疾病類型。

α珠蛋白生成障礙性貧血大多是由于患者體內(nèi)缺失α珠蛋白基因而生成的，也有部分患者是由于基因點(diǎn)發(fā)生突變而造成的。這種遺傳性疾病多見(jiàn)于我國(guó)的南方地區(qū)，即云南、廣西和四川等地方。針對(duì)這種疾病的診斷，業(yè)內(nèi)人士大多采取基因診斷的方法進(jìn)行，并且具有診斷率高的特點(diǎn)。而發(fā)生β珠蛋白生成障礙性貧血的病理非常的復(fù)雜，醫(yī)學(xué)界通常認(rèn)為是由于基因點(diǎn)突變而生成，也有少部分患者是由于基因缺失而造成[3]。對(duì)于β珠蛋白生成障礙性貧血的診斷工作，業(yè)內(nèi)人士大多采用多重突變基因的特異性擴(kuò)增系統(tǒng)診斷法，該診斷方法具有簡(jiǎn)便和可靠的特點(diǎn)，可以廣泛的應(yīng)用在基層的醫(yī)療機(jī)構(gòu)中，對(duì)于那些非缺失型的地中海貧血患者進(jìn)行產(chǎn)前診斷或者是基因診斷具有顯著的臨床功效。

4結(jié)束語(yǔ)

基因診斷在單基因遺傳病中的應(yīng)用已經(jīng)越來(lái)越受到業(yè)內(nèi)人士的關(guān)注，隨著現(xiàn)代生物技術(shù)與遺傳學(xué)科學(xué)的快速發(fā)展和不斷完善，將基因診斷的相關(guān)技術(shù)應(yīng)用于多基因遺傳疾病中的日子已經(jīng)是指日可待。而基因診斷相關(guān)技術(shù)作為基因治療的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，必然會(huì)成為治療人們基因疾病的重要的、主流的技術(shù)，對(duì)于提升我國(guó)衛(wèi)生事業(yè)具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

參考文獻(xiàn)

[1]陳春.簡(jiǎn)述基因診斷在遺傳病中的應(yīng)用[J].生物學(xué)教學(xué)，2009，34（03）：58-59.

第3篇

[關(guān)鍵詞] 核酸適體；靶向配基；腫瘤藥物

[中圖分類號(hào)] R943 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2012）10（c）-0005-03

腫瘤的靶向療法是利用特異性“靶向配基”的介導(dǎo)，將藥物或其他殺傷腫瘤的物質(zhì)選擇性地運(yùn)送到腫瘤部位、選擇性地殺傷腫瘤細(xì)胞以提高治療效果的一種治療方法。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外核酸適體（aptamer）介導(dǎo)的主動(dòng)靶向給藥研究成為熱點(diǎn)。核酸適體（aptamer）是經(jīng)過(guò)一種新的體外篩選技術(shù)（systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX），從隨機(jī)單鏈寡聚核苷酸文庫(kù)中得到的能特異結(jié)合蛋白或其他小分子物質(zhì)的單鏈寡聚核苷酸，可以是RNA，也可以是DNA，長(zhǎng)度一般為25～60個(gè)核苷酸[1]。SELEX技術(shù)自Tuerk等[2]1990年發(fā)明以來(lái)，在臨床診斷、靶向藥物研制方面得以廣泛應(yīng)用。首個(gè)核酸適配體藥物“Macugen”[3]由美國(guó)FDA在2005年批準(zhǔn)上市，成為核酸適配體領(lǐng)域的一個(gè)里程碑。美國(guó)Achemix、SomaLogic，德國(guó)Noxxon AG等多個(gè)公司正在開(kāi)發(fā)核酸適配體藥物和診斷試劑。腫瘤細(xì)胞靶向給藥是提高腫瘤治療效果減少毒副作用的有效途徑。將藥物偶聯(lián)于腫瘤細(xì)胞特異性配體上是靶向給藥的主要方法。核酸能特異性結(jié)合細(xì)胞并且隨之內(nèi)化，是理想的靶向細(xì)胞輸送劑。核酸適體“靶向配基”介導(dǎo)或修飾的藥物及藥物納米制劑，為主動(dòng)靶向腫瘤細(xì)胞給藥系統(tǒng)構(gòu)建開(kāi)拓了新方向。本文簡(jiǎn)要綜述適體作為腫瘤藥物“靶向配基”的應(yīng)用研究。

1 核酸適體作為腫瘤藥物“靶向配基”的優(yōu)勢(shì)

具有高特異性與親和性“靶向配基”的篩選，是制約主動(dòng)靶向給藥系統(tǒng)研究的瓶頸[4-5]。以往修飾腫瘤藥物的“靶向配基”是抗體、多肽和葉酸等分子，但這些配基修飾的靶向藥物在實(shí)際應(yīng)用中均存在著難以克服的缺陷。單克隆抗體潛在的免疫原性和制備的困難大大限制了其臨床的應(yīng)用和產(chǎn)業(yè)化的進(jìn)程[4]；葉酸等小分子雖然有諸多優(yōu)點(diǎn)，但要求病變組織細(xì)胞過(guò)多表達(dá)葉酸受體，靶向作用才得以實(shí)現(xiàn)[4-5]，而核酸適體卻具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1.1 高親合力、強(qiáng)特異性

隨著體外高通量篩選技術(shù)SELEX的發(fā)展，篩選出的適體與配體間的親合力很高。單鏈寡核苷酸只識(shí)別與其互補(bǔ)的空間結(jié)構(gòu)，幾乎可以完全避免非特異性結(jié)合。

1.2 靶標(biāo)普適性

適體與靶標(biāo)的識(shí)別不是堿基配對(duì)，而是與靶標(biāo)在空間結(jié)構(gòu)和構(gòu)象的匹配，是主動(dòng)靶向顯像及主動(dòng)靶向治療的優(yōu)選分子探針。

1.3 成本低廉、篩選制備技術(shù)成熟

目前細(xì)胞-SELEX技術(shù)成熟，適體篩選過(guò)程已實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化[6]；篩選出的適體通過(guò)化學(xué)合成，純度高、準(zhǔn)確性和重復(fù)性好。適體經(jīng)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)修飾[7]，穩(wěn)定性提高，可在常溫下長(zhǎng)期保存及運(yùn)輸。

1.4 無(wú)免疫原性

適體在生物體系中不會(huì)引發(fā)免疫原性，在治療中無(wú)毒性[8]。在“靶向配基”修飾方面更優(yōu)于抗體等。

1.5 受體范圍廣泛

核酸適體結(jié)構(gòu)的多樣性導(dǎo)致其具有從小分子到蛋白質(zhì)，甚至到細(xì)胞的受體[9-10]。

核酸不但是生物體基因信息的儲(chǔ)存與傳遞的載體，而且也具有與蛋白類似的功能。越來(lái)越多的研究結(jié)果表明功能化核酸參與重要生命過(guò)程的調(diào)控。

2 核酸適體在藥物“靶向配基”中的應(yīng)用

2.1 核酸適體作為靶向藥物

首先核酸適體作為抑制劑能抑制腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中的相關(guān)靶蛋白。適體AS1411是首先進(jìn)入臨床研究的抑制癌癥適體藥物，它對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用主要是調(diào)節(jié)核酶活性，損傷DNA，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Laber等[11]進(jìn)行了AS1411又稱為ARG001臨床用藥劑量研究，實(shí)驗(yàn)表明從1 mg/（kg·d）到10 mg/（kg·d）晚期腫瘤患者都有治療效果而且沒(méi)有任何副作用。應(yīng)用SELEX篩選技術(shù)，Chen等[12]成功得到針對(duì)人表皮生長(zhǎng)因子受體-3（HER-3）的細(xì)胞外部分適體。研究指出其中的適體A30可抑制MCF7人乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。

2.2 核酸適體為“靶向配基”的Aptmer-siRNA藥物

利用RNA干擾技術(shù)通過(guò)siRNA給藥能特異性抑制致病基因的表達(dá)，盡管作為藥物，siRNA在多種疾病治療領(lǐng)域有些許研究進(jìn)展[13]。但siRNA本身不具備對(duì)組織或細(xì)胞的靶向能力，靶向性仍然是影響該技術(shù)應(yīng)用到臨床治療上的主要障礙[14]。將核酸適體作為“靶向配基”介導(dǎo)siRNA輸送，能提高siRNA藥物的靶向性。Mcnamara等[15]將核酸適體A10與siRNA連接建立適配體介導(dǎo)的靶向輸送siRNA藥物，干擾PSMA陽(yáng)性表達(dá)的前列腺腫瘤細(xì)胞LNCaP生存所需基因的表達(dá)，并且體外觀察到，A10-siRNA結(jié)合體明顯抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。Chu等[16]成功制備了適配子A9，適配子A9較A10具有更強(qiáng)的特異性識(shí)別前列腺癌變細(xì)胞表面抗原PSMA能力。將A9適配體用生物素-親和素方法偶聯(lián)到siRNA鏈上，構(gòu)建靶向復(fù)合體A9-siRNA，能特異性抑制PSMA陽(yáng)性表達(dá)的前列腺腫瘤細(xì)胞LNCaP生長(zhǎng)。研究同時(shí)指出A9-siRNA偶合體對(duì)基因表達(dá)抑制作用與A9-脂質(zhì)體偶合體類似。

2.3 核酸適體為“靶向配基”的納米粒

時(shí)下不同材料納米粒因其諸多特點(diǎn)：可控釋，易修飾，載藥性及可工業(yè)化生產(chǎn)等，在靶向藥物傳遞系統(tǒng)研究得到關(guān)注。Chen等[17]將巰基修飾的核酸適配子（aptmer）偶聯(lián)到金納米粒子（AuNPs）表面，制備出朊蛋白特異性的Apt-AuNPs納米光學(xué)探針，并成功應(yīng)用到細(xì)胞表面朊蛋白的光散射成像和電子透射顯微成像分析，通過(guò)對(duì)Apt-AuNPs探針進(jìn)入細(xì)胞的途徑研究表明，窖蛋白核酸適配子介導(dǎo)的內(nèi)吞作用可能是其進(jìn)入細(xì)胞的一個(gè)重要途徑。Lili等[18]所在課題組首次成功地用（PAH/PSS）2多層膜以及PAH-g-PEG-COOH修飾了BSA納米粒子，并在粒子表面偶聯(lián)適體AS1411，得到了同時(shí)具有靶向功能和pH響應(yīng)包埋釋放抗癌藥物的納米載體。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證明這種粒子對(duì)肝癌細(xì)胞靶向性明顯，載藥后對(duì)肝癌細(xì)胞毒性增強(qiáng)。將核酸適配體共價(jià)結(jié)合到納米藥物載體上可顯著提升腫瘤靶細(xì)胞對(duì)納米載體的吞噬，增強(qiáng)所載抗癌藥在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。

2.4 核酸適體為“靶向配基”的脂質(zhì)體

脂質(zhì)體作為藥物載體是通過(guò)細(xì)胞的高滲透和高保留效應(yīng)（enhanced permeability and retention，EPR effect）進(jìn)行被動(dòng)靶向。以核酸適體為靶向配基的脂質(zhì)體藥物主動(dòng)靶向運(yùn)輸系統(tǒng)既克服了脂質(zhì)體被動(dòng)靶向的低選擇性，同時(shí)提高了藥物的療效。Cao等[19]將核仁蛋白適體（nucleolin，NCL）偶聯(lián)到順鉑脂質(zhì)納米囊上。用連接NCL-適體的順鉑脂質(zhì)體制劑作用MCF-7人乳腺癌細(xì)胞，存活率僅為40.5%，而未連接NCL-適體的順鉑脂質(zhì)制劑作用MCF-7細(xì)胞，存活率高達(dá)88.9%?！鞍邢蚺浠盢CL-適體大大地提高了藥物的化療效果。Kang等[20]篩選得到了sgc8適體，將適體與包裹了熒光素-右旋糖酐（FITC-Dextran，F(xiàn)D）的脂質(zhì)體相連構(gòu)成適體靶向脂質(zhì)體，用其處理有sgc8受體表達(dá)的CEM-CCRF細(xì)胞和無(wú)sgc8受體表達(dá)的NB4細(xì)胞共同培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)表明該適體靶向脂質(zhì)體對(duì)白血病CEM-CCRF細(xì)胞具有高度選擇性。

2.5 核酸適體為“靶向配基”的藥物

核酸適體修飾藥物是一種理想的靶向腫瘤藥物制備策略。適體A10能特異性靶向結(jié)合前列腺癌變細(xì)胞表面抗原（PSMA）。Bagalkot等[21]將多柔比星扁平的芳香環(huán)與核酸適體A10三維構(gòu)象中的短鏈結(jié)構(gòu)通過(guò)非共價(jià)作用連接，得到了適體-多柔比星靶向藥物。該適體-多柔比星靶向藥物對(duì)PSMA有陽(yáng)性表達(dá)的前列腺癌LNCaP細(xì)胞具有高度的特異靶向作用。Chu等[22]將細(xì)胞毒蛋白gelonin與anti-PSMA適體連接，發(fā)現(xiàn)其對(duì)PSMA陽(yáng)性的LNCaP表達(dá)細(xì)胞的毒性比PSMA陰性的PC-3細(xì)胞大600多倍。

3 展望

由于核酸適體獨(dú)有的特點(diǎn)，適體技術(shù)及其應(yīng)用成為時(shí)下研究的熱點(diǎn)，并在腫瘤的分子水平顯像及應(yīng)用于腫瘤靶向治療（核酸適體做“靶向配基”），取得令人鼓舞的成果。國(guó)內(nèi)譚蔚泓等[23]對(duì)適體的研究也贏得國(guó)內(nèi)外關(guān)注。將適體技術(shù)嫁接到微納米泡的靶向修飾中，有望實(shí)現(xiàn)分子水平的靶向顯像與靶向治療?？傊?，對(duì)核酸適體專家學(xué)者一致認(rèn)為：①核酸適體是潛在靶向藥物配基，同時(shí)能做干擾蛋白質(zhì)靶標(biāo)的靶向藥物，在創(chuàng)新藥物的研制方面具有很大的發(fā)展空間。②核酸適體與抗體相比免疫原性??；與基因治療相比，它可以細(xì)胞外或膜蛋白作為靶標(biāo)，避免必須輸運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)的問(wèn)題。③核酸適體在體內(nèi)的特異性有待驗(yàn)證，改變篩選條件提高適體特異性。

目前核酸適體的腫瘤醫(yī)學(xué)應(yīng)用國(guó)際上還在發(fā)展初期，挑戰(zhàn)與機(jī)遇并存，期盼適體技術(shù)在腫瘤的診斷與靶向治療方面發(fā)揮更大的作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Ellington AD，Szostak JW. In vitro selection of RNA molecules that bind specific-ligands [J]. Nature，1990，346（6287）：818-822.

[2] Tuerk C，Gold L. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment：RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase [J]. Science，1990，249（4968）：505-510.

[3] Khati M. The future of aptamers in medicine [J]. J Clin Pathol，2010，63（6）：480-487.

[4] Parker N，Turk MJ，Westrick E，et al. Folate receptor expression in carcinomas and normal tissues determined by a quantitative radioligand binding assay [J]. Anal Biochem，2005，338（2）：284-293.

[5] Yuan Y，Nymoen DA，Dong HP，et al. Expression of the folate receptor genes FOLR1 and FOLR3 differentiates ovarian carcinoma from breast carcinoma and malignant mesothelioma in serous effusions [J]. Hum Pathol，2009，40（10）：1453-1460.

[6] Hybarger G，Bynum J，Williams RF，et al. A microfluidic SELEX p-prototype [J]. Anal Bioanal Chem，2006，384（1）：191-198.

[7] Chelliserrykattil J，Ellington AD. Evolution of a T7RNA polymerase variant that transcribes 2-O-methyl RNA [J]. Nat Biotechnology，2004，22：1155-1160.

[8] Lopesde WR，Coopusamy D，Morris L，et al. Cytotoxicological analysis of a gp120 binding aptamer with cross-clade human immunodeficiency virus type 1entryinhibition properties：Comparison to conventional antiretroviral [J]. Antimicrobial Agents Chemotherapy，2009，53（7）：3056-3064.

[9] Mallikaratchy P，Tang Z，Meng L，et al. Aptamer directly evolved from live cells recognizes membrane bound immunoglob in heavy mu chain in Burkitt's lymphoma cells [J]. Mol Cell Proteomics，2007，6（12）：2230-2238. [10] Nery AA，Wrenger C，Ulrich H. Recognition of biomarkers and cell-specific molecular signatures：aptamers as capture agents [J]. J Sep Sci，2009，32（10）：1523-1530.

[11] Laber DA，Sharma VR，Bhupalam L，et al. Update on the first phase 1 study of AGR100 in advanced cancer [J]. J Clin Oncol，2005，23：3064.

[12] Chen CH，Chernis GA，Hoang VQ，et al. Inhibition of heregulin signaling by an aptamer that preferentially binds to the oligomeric form of human epidermal growth factor recetor-3 [J]. Proc Acad Sci USA，2003，100（16）：9226-9231.

[13] Keller M. Nanomedicinal delivery approaches for therapeutic siRNA [J]. Int J Pharm，2009，379（2）：210-211.

[14] Rowe W，Platt M，Day PJ. Advances and perspectives in aptamer arrays [J]. Integr Biol：Camb，2009，1（1）：53-58.

[15] Mcnamara JO，Andrechek ER，Wang Y，et al. Cell type-specific delivery of siRNAs with aptamer-siRNA chimeras [J]. Nat Biotechnol，2006，24：1005-1015.

[16] Chu T，Twu KY，Ellington AD，et al. Aptamer mediated siRNA delivery [J]. Nucleic Acids Res，2006，34（10）：e73.

[17] Chen LQ，Xiao SJ，Peng L，et al. Aptamer-conjugated gold nanoparticles as probes for imaging internalized pathways of prion protein [J]. SCIENTIA SINICA：Chimica，2010，40（4）：393-398.

[18] Lili X，Weijun T，Dahai Y，et al. Bovine serum albumin nanoparticles modified with multilayers and aptamer for pH-responsive and targeted anti-cancer drug delivery [J]. Journal of Materials Chemistry，2012，22：6053-6060.

[19] Cao Z，Tong R，Mishra A，et al. Reversible cell-specific drug delivery with aptamer-functionalized liposome s [J]. Angew Chem Int Ed Engl，2009，48（35）：6494-6498.

[20] Kang H，O′Donoghue MB，Liu H，et al. A liposome-based nanostructure for aptamer directed delivery [J]. Chem Commun：Camb，2010，46（2）：249-251.

[21] Bagalkot V，F(xiàn)arokhzad OC，Langer R，et al. An aptamer-doxorubicin physical conjugate as a novel targeted drug-delivery platform [J]. Angew Chem Int Ed Engl，2006，45（48）：8149-8152.

[22] Chu TC，Mark JW，Lavery LA，et al. Aptamer：toxin conjugates that specifically target prostate tumor cells [J]. Cancer Res，2006，66（12）：5982-599.